Bacterial Protein Extraction Kit
細(xì)菌蛋白抽提試劑盒
保存條件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它組分：室溫
產(chǎn)品內(nèi)容
Component | K0888S | K0888M |
25 preps | 100 preps | |
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Bacterial Protein Extraction Reagent | 25 ml | 100 ml |
Protease Inhibitor Cocktail | 250 μl | 1 ml |
Lysozyme （50 mg/ml） | 50 μl | 200 μl |
DNaseⅠ（1,000 U/ml） | 25 μl | 100 μl |
產(chǎn)品簡介
細(xì)菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌及昆蟲細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白提取。提取過程中不需進(jìn)行超聲破碎，有效避免了外源蛋白的污染。本產(chǎn)品可應(yīng)用于從細(xì)菌裂解液中提取可溶性蛋白。細(xì)菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑混合物，可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進(jìn)行IP、Western blot、蛋白純化等下游操作。
注意事項
1．本產(chǎn)品適用于從新鮮或凍存細(xì)菌和昆蟲細(xì)胞中提取蛋白。
2．本品采用Tris緩沖系統(tǒng)，蛋白提取后的純化操作，請使用相同的緩沖系統(tǒng)。
3．使用本產(chǎn)品獲得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法進(jìn)行蛋白定量。
4．對于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰凍樣品。
5．根據(jù)具體情況，可在本產(chǎn)品中加入蛋白酶抑制劑、鹽、螯合劑、還原劑等。
操作步驟
● 昆蟲細(xì)胞蛋白提取
1．低速離心收集細(xì)胞。每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10 μl Protease Inhibitor Cocktail即為1×工作液。
2．稱量細(xì)胞濕重，按10 ml/g的量加入1×工作液。
3．重懸后，冰上孵育20分鐘（冰上放置時間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整）。
4．15,000×g離心15分鐘，分離可溶性蛋白。
● 細(xì)菌可溶性蛋白提取
1．5,000×g離心10分鐘，收集菌體。
2．可選步驟：每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、 2 μl Lysozyme（50 mg/ml）和10 μl Protease Inhibitor Cocktail，渦旋震蕩混勻。
3．按照每克菌體沉淀加入20 ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌體沉
淀中加入抽提液，充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體*重懸。
4．重懸后，室溫孵育10-15分鐘（放置時間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型不同進(jìn)行調(diào)整）。
5．15,000×g離心5分鐘。
6．轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中（上清中即為可溶性蛋白），進(jìn)行蛋白定量及下游實驗。
注意：如目的蛋白以包涵體形式存在，可使用包涵體蛋白溶解液（K0007）進(jìn)行溶解或優(yōu)化表達(dá)
條件增加可溶性蛋白的表達(dá)。
常見問題
問題 | 可能原因 | 解決方法 |
目的蛋白不溶 | 目的蛋白表達(dá)為包涵體 | 優(yōu)化表達(dá)條件或使用包涵體蛋白溶解液 |
在蛋白抽提試劑中加入 Lysozyme 和 DNase I | ||
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加入Lysozyme 后目的蛋白 | 溫度過低 | 將使用試劑恢復(fù)至室溫 |
仍沒有提取出來 | Lysozyme 活性降低或失活 | 加入更多的 Lysozyme 或更換新的酶 |
提取物粘度高 | DNase I 活性降低或失活 | 加入更多的 DNase I 或更換新的 DNase I |
將鎂離子的終濃度增加至 2 mM | ||
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蛋白抽提后仍有大部分蛋 | 蛋白量過大 | 加入 Lysozyme 及 DNase I |
白存在于沉淀中 | ||
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蛋白抽提試劑有沉底析出 | 溫度過低 | 將蛋白抽提試劑恢復(fù)至室溫 |
本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
實驗代做服務(wù)：
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