国模冰冰大胆瓣开下部,97性无码区免费,久久久AV精品波多野结衣,久久精品国产亚洲AV麻豆图片

當(dāng)前位置:
首頁(yè) > 技術(shù)文章 > Protein A+G瓊脂糖凝膠說(shuō)明書(shū)操作步驟
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線
技術(shù)支持Article
Protein A+G瓊脂糖凝膠說(shuō)明書(shū)操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):2440 更新時(shí)間:2022-02-18

                                                                                                                    

Protein A+G瓊脂糖凝膠說(shuō)明書(shū)

 

Protein A+G Agarose  

Cat. No.   K0349    

保存:2-8  

 

組分說(shuō)明

 

 

                                              Cat.No.         K0349

                                              Volume         2 ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

       本產(chǎn)品為Protein A 和  Protein G  共價(jià)交聯(lián)到4% Agarose beads 上的產(chǎn)物,并保存在含有0.05%疊氮鈉的TBS 緩沖液中,2 ml Protein A+G Agarose 中共含有 0.5 ml Agarose beads,約2 mg 重組的Protein A+G。主要用于免疫沉(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP),也可以用于抗體的純化。適用于免疫沉淀所有Protein A Agarose Protein G Agarose 單獨(dú)可以免疫沉淀的抗體,包括Mouse IgG1IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, Rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, Rabbit IgG, Rabbit and Goat polyclonal Abs,以及Human IgG1, IgG2,IgG3 IgG4。本產(chǎn)品如果用于常規(guī)的免疫沉淀,可以免疫沉淀100 次。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。

 

2. Protein A+G Agarose 使用前一定要充分重懸,即充分顛倒若干次使混合均勻。

 

3. 從蛋白樣品收集開(kāi)始,所有步驟中蛋白樣品都必須在4℃或冰上操作。

 

4. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

操作步驟

 

1.  免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)

 

1.1.  蛋白樣品的準(zhǔn)備:

1.1.1  對(duì)于10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中的貼壁細(xì)胞,吸除細(xì)胞培養(yǎng)液,PBS洗滌一次,然后加入500  μl2 ml細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞。

1.1.2.  對(duì)于組織樣品參考貼壁細(xì)胞使用裂解液的比例進(jìn)行裂解。

1.1.3.  對(duì)于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞后,PBS洗滌一次,然后參考貼壁細(xì)胞的裂解方法進(jìn)行裂解。

 

      注:  詳細(xì)的裂解方法參考不同裂解液的詳細(xì)使用方法。如果裂解獲得的蛋白樣品濃度過(guò)高,可以用裂解液或PBS適當(dāng)稀釋,如果蛋白樣品濃度過(guò)低,在以后的裂解過(guò)程中宜適當(dāng)減少裂解液的用量。

1.2.  去除非特異性結(jié)合(可選做)

 

1.2.1.  200  μl1 ml蛋白樣品,蛋白量約為200  μg1 mg,加入約1微克和免疫沉淀時(shí)使用的IgG種屬相同的普通IgG20  μl充分重懸的Protein A+G Agarose4℃緩慢搖動(dòng)30分鐘至2小時(shí)。

1.2.2. 2500 rpm(1000 g)離心5分鐘,取上清用于后續(xù)的免疫沉淀。

 

       注:  所謂種屬相同的IgG是指,例如后續(xù)免疫沉淀時(shí)用的是小鼠IgG,則在本步驟中可以加入normal mouse IgG,如無(wú)normal IgG可以加入其它不影響后續(xù)檢測(cè)的其它mouse IgG類型的抗體。通過(guò)和normal IgGProtein A+GAgarose的孵育,可以充分降低非特異性的結(jié)合,降低背景。

1.3.  免疫沉淀:

1.3.1.  加入0.2-2 μg用于免疫沉淀的一抗,4℃緩慢搖動(dòng)過(guò)夜。

1.3.2.  再加入20 μl充分重懸的Protein A+G Agarose,4℃緩慢搖動(dòng)1-3個(gè)小時(shí)。(為方便后續(xù)的洗滌操作可以把加入充分重懸的Protein A+G Agarose的量調(diào)整為40微升。)

1.3.3. 2500 rpm(1000 g)離心5分鐘,或瞬時(shí)高速離心,小心吸除上清,注意寧可留下少量上清也不能吸掉Protein A+G Agarose。

1.3.4.  用準(zhǔn)備蛋白樣品時(shí)的裂解液或PBS洗滌沉淀5次,裂解液或PBS的用量每次為0.5-1 ml。洗滌時(shí)離心條件和吸除上清的要求同上面的步驟C3

1.3.5.  完成最后一次洗滌后,去除上清,加入20-40  μl 1XSDS-PAGE電泳上樣緩沖液Vortex重懸沉淀,瞬時(shí)高速離心把樣品離心至管底。

1.3.6. 100℃或沸水浴處理3-5分鐘,取部分或全部樣品用于SDS-PAGE電泳,暫時(shí)不用的樣品可以-20℃保存。

 

2.  免疫共沉淀:

 

   參考免疫沉淀的方法進(jìn)行,但免疫共沉淀(CO-IP)通常必須使用未經(jīng)凍存的新鮮蛋白樣品。普通的免疫沉淀雖然可以使用凍存的蛋白樣品,但也宜用新鮮的蛋白樣品為佳。

 

 

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

精品久久久久久久无码久中文字幕| 日本边摸边吃奶边做视频叫床| 男人J放进女人P全黄动态图| 久久天堂AV综合合色蜜桃网| 河南妇女毛浓浓BW| 色婷婷激情AV精品影院| 成人性做爰AAA片免费看曹查理 | 口述他进我身体全过程| 99久久久无码国产AAA精品| 狠狠色噜噜狠狠狠狠7777| 精品一区二区三区在线成人| 伊人激情AV一区二区三区| 纯爱无遮挡H肉动漫在线播放| A片粗大的内捧猛烈进出AVV| 成熟人妻换XXXX| 公交车强摁做开腿呻吟| 日本丰满人妻XXXXXHD| 久久午夜夜伦鲁鲁片免费无码影视| 亚洲国产精品成人麻豆| 亚洲AV成人无码久久A片| 国产精品9999久久久久| 熟妇内谢69XXXXXA片| 名门嫡姝-213大H慎入| 老师穿超短包臀裙办公室爆乳| 男男无码SM调教GV观看日本| 秋霞成人无码免费A片| 无人视频在线观看完整版高清中文| 偷看各类WC女厕嘘嘘近距离| 久久久欧美国产精品人妻噜噜| 国模雨珍浓密毛大尺度150P | 精品人妻AV无码一区二区三区| 小雪被老外黑人撑破了视频| 里番本子库绅士ACG全彩无码| 无码一区二区三区在线观看| 中文字幕人妻熟女人妻A片| 亚洲国产婷婷香蕉久久久久久| 久久精品AⅤ无码中文字字幕蜜桃| 又硬又粗进去好爽A片天美APP| 沦为公妓的清纯校花H| 人善交ZZZZXXXXX另类| 久久久久无码国产精品一区|