技術(shù)支持Article
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)是用于細(xì)胞因子檢測(cè)的方法
點(diǎn)擊次數(shù)：823 更新時(shí)間：2023-02-07
細(xì)胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用，在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下，部分細(xì)胞因子會(huì)明顯變化，根據(jù)這些指標(biāo)可以判斷機(jī)體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細(xì)胞因子檢測(cè)可以對(duì)疾病診斷和治療做出相應(yīng)評(píng)價(jià),具有重要的應(yīng)用價(jià)值。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細(xì)胞術(shù)是細(xì)胞因子檢測(cè)的一種方法。
由于血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清、積液中的細(xì)胞因子含量低，不容易檢測(cè)，加上樣本數(shù)量少，傳統(tǒng)的方法無法滿足多因子檢測(cè)。流式微球捕獲芯片技術(shù)（CBA）微量樣本多重蛋白定量技術(shù)，是用流式細(xì)胞儀對(duì)多重蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)的方法，能夠同時(shí)對(duì)樣本中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行定性、定量檢測(cè)，可用于細(xì)胞因子檢測(cè)。
流式細(xì)胞儀技術(shù)（FCM）技術(shù)可以應(yīng)用流式細(xì)胞儀，結(jié)合單克隆抗體技術(shù)、免疫熒光染色技術(shù)，對(duì)快速流動(dòng)液體中的單細(xì)胞進(jìn)行多種參數(shù)測(cè)量和分析。CBA檢測(cè)系統(tǒng)采用聚苯乙/烯熒光微球連結(jié)特定的捕獲抗體，捕捉待測(cè)物，同時(shí)再加入待測(cè)物的熒光抗體，三者形成夾心復(fù)合物，通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。流式細(xì)胞術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)可以進(jìn)行多參數(shù)檢測(cè)，快速并且信息量大。
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)用于細(xì)胞因子檢測(cè)是一種相對(duì)快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。但由于胞內(nèi)分析步驟復(fù)雜，涉及變異因素多，可能會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不穩(wěn)定，較難重復(fù)等問題。
如在檢測(cè)血清時(shí)，由于血清成分復(fù)雜，細(xì)胞因子含量差距大，實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現(xiàn)象，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙/烯材料制作而成，血清加入微球之后如果沒有充分渦旋，容易沉淀聚集，細(xì)胞因子不能充分跟微球結(jié)合，導(dǎo)致多群甚至聚集現(xiàn)象發(fā)生，檢測(cè)結(jié)果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實(shí)驗(yàn)管，直到上機(jī)檢測(cè)前每一步都必須充分渦旋，以避免微球發(fā)生聚集。
